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                                    捷世康生物是一家專注于生命科學和生物技術領域的“新星”企業,產品及代理品牌產品范圍涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學、生物化學等生命科學相關領域及相關實驗室消耗品

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                                    堿性磷酸酶染色液

                                    點擊次數:4094 日期:2019/6/12 14:38:34

                                    堿性磷酸酶染色液
                                    產品簡介:
                                         堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內,其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮,還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。
                                         堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下細胞內堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯重氮鹽生成有色產物,定位于細胞質中,該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結果較金屬鹽沉淀法可靠。
                                    產品組成:
                                    產品
                                    3*10ml
                                     3*20ml
                                    Storage
                                    試劑(A):ALP固定液
                                    100ml
                                    20ml
                                    RT 避光
                                    試劑(B): ALP 孵育液
                                    B1:AS-BI染色液
                                    3*2ml
                                    5*2ml
                                    -20℃避光
                                    B2:FBB染色液
                                    5ml
                                    10ml
                                    4℃避光
                                    臨用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即為 ALP 孵育液,即配即用。
                                    試劑(C):核固紅染色液
                                    10ml
                                    20ml
                                    4℃避光
                                    使用說明書
                                             1份
                                    自備材料:
                                    1、載玻片、濕盒
                                    2、顯微鏡
                                    3、4%多聚甲醛固定液(備選)
                                    操作步驟(僅供參考):
                                    1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。
                                    2、滴加配制好的 ALP 孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,水洗。
                                    3、入核固紅染色液復染 3~5min。
                                    4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
                                    (二) 貼壁培養細胞
                                    1、取6孔板或其他容器培養的細胞,棄液,PBS清洗干凈。
                                    2、加4%多聚甲醛固定10~20min,PBS 清洗。
                                    3、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,PBS清洗。
                                    4、入核固紅染色液復染0.5~3min。
                                    5、PBS 清洗、鏡檢。
                                    染色結果:
                                    ALP 活性部位
                                    藍色
                                    細胞核
                                    紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
                                     
                                    血液、骨髓涂片結果判斷:
                                    一般以積分報告結果,根據100個中性粒細胞陽性顆粒進行 0~4+計分。
                                    細胞分值
                                    染色特點
                                    0
                                    無顆粒
                                    1
                                    稍有顆粒
                                    2
                                    中等程度顆粒
                                    3
                                    多數顆粒
                                    4
                                    充滿顆粒
                                    臨床意義:
                                    1、類白血病反應積分明顯增高,未經治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。
                                    2、急性細菌性感染積分明顯增高,病毒性感染積分多正;驕p低。
                                    3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS 積分常減低。
                                    注意事項:
                                    1、AS-BI 染色液易失效,應避免反復凍融,臨用前低溫緩慢溶解,不可用溫水或熱水助溶。
                                    2、ALP 孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。
                                    3、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。
                                    4、培養細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應輕微,以免損傷或丟失細胞。
                                    5、培養細胞或細胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液,ALP 固定液更適用于血液或骨
                                    髓細胞圖片的固定,染色時間應根據具體細胞特性而異。
                                    有效期:12個月有效。

                                    原創作者:青島捷世康生物科技有限公司

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