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                                    捷世康生物是一家專注于生命科學和生物技術領域的“新星”企業,產品及代理品牌產品范圍涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學、生物化學等生命科學相關領域及相關實驗室消耗品

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                                    技術文獻

                                    超氧陰離子(OFR)含量檢測試劑盒

                                    點擊次數:2813 日期:2021/6/21 14:46:46

                                    超氧陰離子(OFR)含量檢測試劑盒
                                    貨號:H0142

                                    規格:50T/48S

                                    注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

                                    產品內容:

                                    提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

                                    試劑一:液體32mL×1瓶,4℃保存。

                                    試劑二:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。

                                    試劑三:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。

                                    試劑四:氯仿,自備。    

                                    亞硝酸鈉標準品:液體1mL×1支,4℃保存。10μmol/mL亞硝酸鈉。

                                    產品說明:

                                    生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用,導致機體細胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。

                                    超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2-,NO2-在對氨基苯磺酰胺和萘乙二胺鹽酸鹽的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm有特征吸收峰,根據A530值可以計算樣品中O2-含量。

                                    自備實驗用品及儀器:天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。

                                    操作步驟

                                    一、超氧陰離子提取

                                    1.植物、動物組織:稱取約0.1g樣本,加入提取液1mL,充分研磨,12000rpm,4℃,離心20min,取20μL上清測定蛋白含量,其余上清作為待測樣本。

                                    2.血清或培養液:直接測定

                                    二、測定操作表

                                    1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至530nm,蒸餾水調零。

                                    2、標準溶液的制備

                                    稱取適量亞硝酸鈉標準液,首先16倍稀釋至 0.625µmol/mL,然后進行倍比稀釋至 0.3125、0.15625、 0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.0049、0.00244、0.0012、0.0006µmol/mL 梯度稀釋的標準溶液, 用0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.00244、0.0006µmol/mL 標準管做標準曲線。

                                    3、操作表

                                     

                                    空白管

                                    測定管

                                    標準管

                                    標準溶液(mL)

                                     

                                     

                                    0.2

                                    樣本(mL)

                                     

                                    0.2

                                     

                                    提取液(mL)

                                    0.5

                                    0.3

                                    0.3

                                    試劑一(mL)

                                    0.4

                                    0.4

                                    0.4

                                    混勻,37℃水浴20min

                                    試劑二(mL)

                                    0.3

                                    0.3

                                    0.3

                                    試劑三(mL)

                                    0.3

                                    0.3

                                    0.3

                                    混勻,37℃水浴 20min

                                    試劑四(mL)

                                    0.5

                                    0.5

                                    0.5

                                    混勻,8000rpm,25℃,離心 5min,小心吸取上層水相 1mL,蒸餾水調零,

                                    1mL 玻璃比色皿,測定 A530。計算∆A 標準=A 標準管-A 空白管,∆A 樣品=A 測定管-A 空白管。每次實驗空白管僅需做一管。

                                    三、超氧陰離子含量計算公式

                                    1.標準曲線的繪制

                                    ∆A 標準為 y 軸,標準溶液濃度為 x 軸,繪制標準曲線 y=kx+b。

                                    2.超氧陰離子含量的計算

                                    ∆A 樣品帶入方程得到 x 值(µmol/mL)

                                    (1) 按照樣本鮮重計算

                                    超氧陰離子含量(µmol/g鮮重)= 2x×V 樣本÷(V 樣本÷V 提取×W)=2x÷W。

                                    超氧陰離子產生速率(µmol/ min/g鮮重)= 2x×V 樣本÷(V 樣本÷V 提取×W)÷T=0.1x÷W。

                                    (2) 按照蛋白質濃度計算

                                    超氧陰離子含量(µmol/min/mg prot)= 2x×V 樣本÷(V樣本×Cpr)=2x÷Cpr。

                                    超氧陰離子產生速率(µmol/min/mg prot)= 2x×V樣本÷(V 樣本×Cpr)÷T=0.1x÷Cpr。

                                    (3) 按照血清或培養液體積計算

                                    超氧陰離子含量(µmol/mL)= 2x

                                    超氧陰離子產生速率(µmol/min/mL)= 2x÷T=0.1x。

                                    V 樣本:參與反應樣本體積,0.2mL;V提。禾崛∵^程中加入的提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品鮮重,g;T:反應時間,20min。

                                    超氧陰離子(OFR)含量檢測試劑盒注意事項:

                                    1、OD值大于1.0,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。

                                    2、樣品制備好之后,立刻進行測定,請勿將樣品進行長時間的低溫保存,以免影響測定結果。

                                    3、試劑四有一定的毒性,請操作時做好防護措施。

                                    原創作者:青島捷世康生物科技有限公司

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